1. Tên khác, chỉ số

Vàng nghệ, Kurkum

INS: 100i

ADI = 0 – 3 mg/kg thểtrọng.

2. Định nghĩa

Curcumin được sản xuất bằng cách chiết củ nghệ - thân rễ của cây Curcuma longa L. (Curcuma domestica Valeton) bằng dung môi. Để thu được bột curcumin có hàm lượng cao, dịch chiết được tinh chế bằng phương pháp kết tinh. Sản phẩm thu được chứa các curcumin, thành phần màu chính là 1,7-bis-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-hepta-1,6-dien-3,5-dion (tên khác: Curcumin, Diferuloylmethan, CI Natural Yellow 3, CI (1975) 75300) và dẫn chất desmethoxy- và bis-desmethoxy- của nó theo tỷ lệ không cố định. Trong chế phẩm có thể chứa lượng nhỏ dầu và nhựa từ nguyên liệu. Chỉ các dung môi sau đây có thể được sử dụng trong quá trình chiết và tinh chế curcumin: Aceton, methanol, ethanol, iso-propanol, hexan và ethyl acetat. Carbon dioxyd siêu tới hạn cũng có thể được sử dụng trong quá trình chiết.

Tên hóa học

Các thành phần màu chính:

Mã số C.A.S.

Công thức hóa học

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

3. Cảm quan

Bột tinh thể màu vàng cam.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Không tan trong nước và diethyl ether; tan trong ethanol và acid acetic băng.

Các phản ứng màu

Dung dịch mẫu thử trong ethanol có màu vàng và cho huỳnh quang xanh nhạt. Thêm dung dịch mẫu thử này vào acid sulfuric đặc sẽ có màu đỏ thẫm.

Sắc ký bản mỏng

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử).

5.2. Độ tinh khiết

Tồn dư dung môi

Chì

Không được quá 2 mg/kg

5.3. Hàm lượng

Không nhỏ hơn 90% tổng các thành phần màu.

6. Phương pháp thử

6.1. Định tính

Các phản ứng màu

Xử lý dung dịch mẫu thử trong nước hoặc trong ethanol loãng với acid hydrocloric đến khi màu cam bắt đầu xuất hiện. Chia dung dịch sau khi xử lý thành 2 phần, thêm bột (hoặc tinh thể) acid boric vào 1 phần. Màu đỏ hồng sẽ xuất hiện nhanh sau khi thêm, màu sẽ dễ nhận biết hơn khi so với phần không thêm acid boric. Phản ứng có thể tiến hành bằng cách nhúng một mẩu giấy lọc vào dịch mẫu thử tan trong ethanol, làm khô tại 100^o, sau đó tẩm ướt mẩu giấy lọc bằng dung dịch acid boric loãng đã thêm vài giọt acid hydrocloric. Để khô, sẽ xuất hiện màu đỏ hồng.

Sắc ký bản mỏng

Chấm 5mL dịch thử (0,01 g mẫu thử trong 1 ml ethanol 95%) trên 1 bản mỏng sắc ký (cellulose vi tinh thể; 0,1 mm). Khai triển sắc ký trong bình chứa hỗn hợp dung môi pha động 3-methyl-1-butanol/ethanol/nước/dung dịch amoniac (4:4:2:1), để dung môi khai triển trên bản mỏng 10-15 cm từ vạch xuất phát. Kiểm tra, quan sát dưới ánh sáng thường và đèn UV:

Dưới ánh sáng thường và UV có 2 hoặc 3 vết màu vàng vớiR_f trong khoảng 0,2 - 0,4.

Dưới đèn UV có các vết với R_f khoảng 0,6 và 0,8

Các vết đều có huỳnh quang màu vàng dưới đèn UV.

6.2 Độ tinh khiết

Chì

Xác định bằng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp cho hàm lượng quy định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

6.3. Định lượng

Cân 0,08 g mẫu thử (chính xác đến mg), chuyển vào bình định mức 200 ml và hoà tan bằng lắc với ethanol, định mức đến vạch bằng ethanol. Dùng pipet hút 1 ml dung dịch và cho vào bình định mức 100 ml, định mức đến vạch bằng ethanol.

Xác định độ hấp thụ quang tại 425 nm, cuvet đo dày 1 cm. Tính tỷ lệ tổng hàm lượng chất màu trong mẫu thử theo công thức:

Trong đó:

A = độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử

W = Khối lượng mẫu thử

1607 = Độ hấp thụ riêng của dung dịch curcumin chuẩn trong ethanol tại 425 nm.

Việc xác định độ hấp thụ quang phải tiến hành ngay khi pha xong dung dịch, bởi vì màu của dung dịch có thể nhạt dần theo thời gian.

1. Tên khác, chỉ số

Vitamin B₂, Lactoflavin

INS: 101i

 ADI = 0 - 0,5 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Tên hóa học

Riboflavin; 3,10-dihydro-7,8-dimethyl-10-[(2S,3S,4R)-2,3,4,5-tetrahydroxypentyl]benzo-[g]pteridin-2,4-dion; 7,8-dimethyl-10-(1'-Dribityl) isoalloxazin.

Mã số C.A.S.

83-88-5

Công thức hóa học

C₁₇H₂₀N₄O₆

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

376,37

3. Cảm quan

Bột tinh thể màu vàng đến vàng cam, có mùi nhẹ.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Rất khó tan trong nước, thực tế không tan trong cồn, ether, aceton và cloroform; rất dễ tan trong dung dịch kiềm loãng.

Quang phổ

Sử dụng dung dịch mẫu thử trong nước, đã chuẩn bị trong phần Định lượng, xác định độ hấp thụ quang (A) tại các bước sóng 267 nm, 375 nm, 444 nm.

Tỷ số A₃₇₅/A₂₆₇ nằm trong khoảng 0,31 và 0,33.

Tỷ số A₄₄₄/A₂₆₇ nằm trong khoảng 0,36 và 0,39.

Góc quay cực riêng

[a]20,D: trong khoảng -115^o và -140^o.

Phản ứng màu

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử).

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô

Không được quá 1,5%.

Tro sulfat

Không được quá 0,1%.

Các chất màu phụ

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử).

Các amin thơm bậc nhất

Không được quá 100 mg/kg tính theo anilin.

Chì

 Không được quá 2 mg/kg.

5.3. Hàm lượngC₁₇H₂₀N₄O₆

Không được thấp hơn 98%.

6.Phương pháp thử

6.1 Định tính

Góc quay cực riêng

Sấy khô mẫu tại 100 ^oC trong 4 gờ. Cân 50 mg và hòa tan trong dung dịch natri hydroxyd 0,05 N không có carbonat và pha loãng đến đủ 10 ml cũng bằng dung dịch này. Đo độ quay quang của dung dịch trong 30 phút kể từ khi pha dung dịch.

Phản ứng màu

Hòa tan khoảng 1 mg mẫu vào 100 ml nước. Dung dịch có màu vàng xanh nhạt khi cho ánh sáng truyền qua và có huỳnh quang xanh vàng đậm với ánh sáng phản xạ. Màu sẽ bị mất khi thêm acid vô cơ hoặc kiềm vô cơ.

6.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô

Sấy tại 105 ^oC, trong 4 giờ

Tro sulfat

- Thử theo JECFA monograph 1 - vol.4

- Mẫu thử: cân 2 g

Các chất màu phụ

Chuẩn bị dung dịch chuẩn không có lumiflavin cho thử nghiệm bằng cách pha loãng 3 ml dung dịch kali dicromat 0,1 N với nước đến đủ 1000 ml. Cho một ít cloroform qua cột nhôm oxyd để loại hết ethanol. Lấy 10 ml cloroform này, thêm 35 mg mẫu, lắc trong 5 phút và lọc. Mật độ màu của dịch lọc không được đậm hơn mật độ màu của 10 ml chuẩn khi quan sát trong dụng cụ chứa cùng loại

Chì

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1 - vol.4. Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong Phụ lục 1: Các phương pháp thử chung phần các phương pháp phân tích công cụ

6.3. Định lượng

Tiến hành định lượng trong môi trường ít ánh sáng. Phân tán 65,0 mg mẫu thử trong 5 ml nước trong bình định mức 500 ml màu nâu, cần đảm bảo rằng toàn bộ mẫu thử đã bị tẩm ướt, hòa tan trong 5 ml dung dịch natri hydroxyd 2 N. Ngay khi mẫu tan hoàn toàn, thêm 100 ml nước và 2,5 ml acid acetic băng và pha loãng bằng nước đến đủ 500 ml. Lấy 20,0 ml dung dịch này, thêm 3,5 ml dung dịch natri acetat 1,4% (kl/tt) và pha loãng với nước đến đủ 200 ml. Đo độ hấp thụ quang (A) tại cực đại hấp thụ 444 nm.

% Riboflavin = [(A×5000) / (328×W)] × 1,367

trong đó

A = độ hấp thụ của dung dịch mẫu thử tại 444 nm

W = Khối lượng mẫu thử, tính bằng g.

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Yellow 4, FD&C Yellow No. 5; Số CI (1975): 19140

INS: 102

ADI = 0 - 7,5 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm Trinatri 5-hydroxy-1-(4-sulfonphenyl)-4-(4-sulfonphenylazo)-H-pyrazol-3-carboxylat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Trinatri 5-hydroxy-1-(4-sulfonphenyl)-4-(4-sulfonphenylazo)-H-pyrazol-3-carboxylat

Mã số C.A.S.

1934-21-0

Công thức hóa học

C₁₆H₉N₄Na₃O₉S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

534,37

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu cam nhạt.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của các chất màu

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

 Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

 Không được quá 1%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% (tổng các acid Tetrahydroxysuccinic; acid 4-Hydrazinbenzensulfonic;

acid 4-Aminobenzensulfonic; acid 5-Oxo-1-(4-sulfophenyl)-2-pyrazolin-3-carboxylic; acid 4,4'-Diazoaminodi (acid benzensulfonic).

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4, Các phương pháp thử chung phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; chiều cao của tuyến dung môi ~ 12 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2 đến 100% với tốc độ tăng cố định 2%/phút.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong Phụ lục 1: Các phương pháp thử chung) như sau:

Cân 0,6 - 0,7 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydro tartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 13,56 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

CI food yellow 13, CI (1975) No. 47005,

INS: 104

ADI= 0 – 10 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chế phẩm thu được bằng cách sulfonat hoá 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion hoặc hỗn hợp chứa khoảng hai phần ba 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion và một phần ba 2-[2-(6-methyl-quinolyl)]1,3-indandion; Chế phẩm chứa hỗn hợp muối natri của các disulfonat (chủ yếu), các monosulfonat and các trisulfonat của các hợp chất nêu trên và các chất màu phụ cùng với natri clorid và/hoặc natri sulfat là các thành phần chính không tạo mầu.

Quinolin có thể chuyển thành dạng màu nhôm tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy chuẩn chung cho dạng màu nhôm của các phẩm màu.

Tên hóa học

Dinatri 2-(1,3-dioxo-2-indanyl)-6,8-quinolin sulfat; dinatri 2-(2-quinolyl)-indan-1,3-dion disulfonat (thành phần chính)

Mã số C.A.S.

8004-72-0 (acid disulfonic không methyl hóa)

Công thức hóa học

C₁₈H₉NNa₂O₈S₂ (thành phần màu chính)

Công thức cấu tạo

Thành phần màu chính

6 muối: R₁ = SO₃Na, R₂ = H

8 muối: R₁, R₂ = SO₃H

Khối lượng phân tử

Thành phần màu chính: 477,38

3. Cảm quan

Bột hoặc hạt nhỏ màu vàng.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của các chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi sấy tại 135^o

Không được quá 30% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Kẽm

Không được quá 50 mg/kg.

Các chất màu phụ

Tổng hàm lượng 2 chất 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion và 2-[2-(6-methylquinolyl)]-1,3-indandion Không được quá 4 mg/kg

Các hợp chất hữu cơ ngoài các thành phần màu

Tổng hàm lượng các chất 2-methylquinolin, acid 2-methylquinolinsulfonic, acid phtalic, 2,6-dimethylquinolin, acid 2,6-dimethylquinolin sulfonic Không được quá 0,5%

Các amin thơn bậc nhất không sulfonat hóa

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3. Hàm lượng

Không nhỏ hơn 70% tổng các thành phần màu. Đối với chế phẩm quinolin vàng sản xuất từ 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion sẽ có các thành phần sau:

- Không nhỏ hơn 80% dinatri 2-(2-quinolyl)-indan- 1,3-diondisulfonat;

- Không được quá 15% natri 2-(2-quinolyl)-indan-1,3-dionmonosulfonat;

- Không được quá 7% trinatri 2-(2-quinolyl)-indan-1,3- diontrisulfonat;

6. Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4. Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4, Các phương pháp thử chung phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

Thử giới hạn của 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion và 2-[2-(6-methylquinolyl)]-1,3-indandion.

Sử dụng thiết bị và ether có chất lượng theo mô tả trong chuyên luận xác định chất có thể chiết bằng ether và tiến hành chiết như sau: Rửa dịch chiết 2 lần mỗi lần với 25 ml nước cất. Cho ether bay hơi để dịch chiết còn khoảng 5 ml, sau đó cho vào tủ sấy tại nhiệt độ 105^o để đuổi hết ether. Hoà tan cặn còn lại trong cloroform và pha loãng đến chính xác 10 ml. Xác dịnh độ hấp thụ quang của dung dịch này tại bước sóng hấp thụ cực đại (khoảng 420 nm) sử dụng cloroform làm dung dịch đối chứng. Giá trị độ hấp thụ quang = 0,27 tương ứng với giới hạn của 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion là 4 mg/kg. 2-[2-(6-methylquinolyl)]-1,3-indandion được đánh giá như 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion.

Các hợp chất hữu cơ ngoài các thành phần màu

Các hợp chất hữu cơ ngoài các thành phần màu trong quinolin chỉ có trong chế phẩm sản xuất từ 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion.

Xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng, với các điều kiện như sau:

Thiết bị: Sắc ký lỏng phân giải cao có bộ điều khiển gradien nồng độ pha động.

Detector: Detector UV cho HPLC có thể đo độ hấp thụ quang tại 254 nm.

Cột: Nucleosil, 250X4 mm, 7mm.

Hệ dung môi:

A: Đệm acetat pH 4,6:nước (1:10). Đệm acetat bao gồm dung dịch NaOH 1M : acid acetic 1 M : nước (5:10:35).

B: (A):methanol (20:80).

Nồng độ mẫu 1%(m/v) trong dung môi A.

Điều kiện gradient nồng độ pha động:

Tốc độ dòng: 1 ml/phút

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận Xác định tổng hàm lượng bằng phương pháp quang phổ (JECFA monograph 1 - Vol. 4).

Dung môi: Đệm photphat pH 7

Pha loãng dung dịch A: từ 10 ml pha đến 250 ml

Độ hấp thụ riêng (a): 86,35

Bước sóng hấp thụ cực đại: 415 nm

Riêng đối với chế phẩm quinolin sản xuất từ 2-(2-quinolyl)-1,3-indandion xác định tỷ lệ % của di-, mono-, trisulfonat: Sử dụng điều kiện HPLC mô tả trong chuyên luận xác định các hợp chất hữu cơ ngoài thành phần màu, với nồng độ dung dịch mẫu thử trong dung môi HPLC A là 0,05% thay cho 1%. Biểu thị kết quả theo tỷ lệ % tổng các thành phần màu có trong chế phẩm.

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Yellow 3, FD&C Yellow No. 6; Số CI (1975): 15985

INS: 110

ADI = 0 - 2,5 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 6-hydroxy-5-(4-sulfonphenylazo)-2-naphthalen-6-sulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

dinatri 6-hydroxy-5-(4-sulfonphenylazo)-2-naphthalen-6-sulfonat.

Mã số C.A.S.

2783-94-0

Công thức hóa học

C₁₆H₁₀N₂Na₂O₇S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

452,38

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ cam.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của các chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135^oC

Không được quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 5%.

Trong đó không được quá 2% các chất màu khác ngoài trinatri 2-hydroxy-1-(4-sulfonphenylazo)naphthalen-3,6-disulfonat.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% tổng các acid 4-amino-1-benzensulfonic;

Acid 3-hydroxy-2,7-naphthalendisulfonic;

Acid 6-hydroxy-2-naphthalensulfonic;

Acid 7-hydroxy-1,3-naphthalendisulfonic;

Acid 4,4'-diazoaminodibenzensulfonic;

Acid 6,6'-dioxy-2-naphthalensulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2 đến 100% với tốc độ tăng cố định 4%/phút, tiếp theo rửa giải tại 100%.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,5 - 0,6 g mẫu thử;

Đệm 10 g natri citrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 11,31 mg các chất màu (D).

PHỤ LỤC 6

QUY YÊU CẦU KỸ THUẬT VÀ PHƯƠNG PHÁP THỬ ĐỐI VỚI CARMIN

1. Tên khác, chỉ số

Cochineal carmin, CI Natural Red 4, CI (1975) No. 75470,

INS 120

ADI cho cả nhóm carmin là 0 - 5 mg/kg thể trọng tính theo amoni carminat, các muối Ca, K, Na quy ra tương đương.

2. Định nghĩa

Chế phẩm thu được bằng cách chiết từ phẩm yên chi chứa xác khô của rệp son cái (Dactylopius coccus Costa) với nước; Chất màu chính là một phức chelat nhôm ngậm nước của acid carminic, trong phức này tỷ lệ phân tử giữa nhôm và acid carminic là 1/2.

Trong chế phẩm thương mại, chất màu chính kết hợp với cation amoni; calci; kali hoặc natri, ở dạng tự do hay kết hợp, các cation này luôn dư. Trong chế phẩm có thể chứa protein từ xác côn trùng nguyên liệu, có thể chứa muối carminat và lượng dư ít cation nhôm.

Tên hóa học

Phức chelat nhôm ngậm nước của acid carminic (7-beta-D-glucopyranosyl-3,5,6,8-tetrahydroxy-1-methyl-9,10-dioxo-anthracen-2-carboxylic acid)

Mã số C.A.S.

1390-65-4 (carmin)

1260-17-9 (acid carminic)

Công thức hóa học

Acid carminic C₂₂H₂₀O₁₃

Công thức cấu tạo

Acid carminic

Phức nhôm của acid carminic

Khối lượng phân tử

Acid carminic: 492,39

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc mảnh vụn màu đỏ tới đỏ đậm

4. Chức năng

Phẩm màu

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Độ tan của chế phẩm carmin phụ thuộc vào bản chất của cation có mặt trong chế phẩm. Chế phẩm chứa chủ yếu cation amoni (muối amoni carminat) tan tốt trong nước tại pH 3,0 và pH 8,5. Chế phẩm chứa chủ yếu cation calci (muối calci carminat) ít tan trong nước tại pH 3,0 nhưng tan tốt tại pH 8,5.

Phản ứng màu

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử)

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô

Không được quá 20%.

Tro toàn phần

Không được quá 12%.

Protein

Không được quá 25%.

Chất không tan trong dung dịch amoniac loãng

Không được quá 1%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Yêu cầu về vi sinh vật

Salmonella: Âm tính.

5.3. Hàm lượngC₂₂H₂₀O₁₃

Không thấp hơn 50% C₂₂H₂₀O₁₃ tính theo chế phẩm đã làm khô.

6. Phương pháp thử

6.1 Đính tính

Phản ứng màu

- Kiềm hóa nhẹ dung dịch mẫu thử bằng cách thêm 1 giọt dung dịch natri hydroxyd (hoặc kali hydroxyd) 10%. Dung dịch chuyển sang màu tím.

- Thêm một ít tinh thể natri dithionit (Na₂S₂O₄) vào các dung dịch mẫu thử trung tính, đã kiềm hóa, đã acid hóa. Các dung dịch này không bị mất màu.

- Làm khô lượng nhỏ mẫu thử trên đĩa sứ. Để nguội hoàn toàn, nhỏ 1-2 giọt thuốc thử acid sulfuric vào cặn còn lại trên đĩa. Màu của cặn không thay đổi.

- Acid hóa dung dịch mẫu thử trong nước bằng dung dịch thuốc thử acid hydrocloric, thể tích thuốc thử bằng 1/3 thể tích dịch thử, cho thêm rượu amylic, lắc đều. Tách lấy lớp rượu amylic và rửa 2-4 lần với đồng thể tích nước cất để loại hòan toàn acid hydrocloric. Pha loãng phần rượu amylic với ether dầu hoả (40-60 ⁰) đồng thể tích hoặc thể tích ether dầu hoả gấp đôi, lắc vài lần với một ít nước cất để loại hết màu. Thêm, nhỏ từng giọt dung dịch urani acetat 5%, lắc đều sau mỗi lần thêm. Dung dịch chuyển sang màu xanh lục ngọc đặc trưng.

6.2 Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- sấy tại 135 ^oC trong 3 giờ.

Tro toàn phần

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- chuyên luận xác định tro, cân 1 g mẫu.

Protein

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- chuyên luận xác định Nitơ phi amoni X 6,25

Chất không tan trong dung dịch amoniac loãng

Cân 0,25 g (chính xác đến mg) mẫu thử đã được làm khô, hoàn tan trong 2,5 ml dung dịch amoniac loãng (160 ml dung dịch thuốc thử amoniac đặc, thêm nước cất đến 500 ml) và pha loãng với nước cất đến 100 ml, thu được dung dịch trong. Lọc dung dịch này qua phễu thuỷ tinh xốp. Rửa phễu với dung dịch amoniac 0,1% và làm khô đến khối lượng không đổi tại 105^o.

Chì

Xác định bằng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp cho hàm lượng quy định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

6.3. Định lượng

Cân 100 mg (chính xác đến mg) mẫu thử, hoà tan vào 30 ml dung dịch acid hydrocloric 2N sôi, làm nguội. Chuyển toàn bộ dung dịch sang bình định mức 1000 ml, pha loãng và định mức tới vạch bằng nước cất, lắc đều. Xác định độ hấp thụ quang của dung dịch tại bước sóng hấp thụ cực đại khoảng 494 nm, sử dụng mẫu trắng là nước cất, cuvet đo có độ dày 1 cm. Tính hàm lượng % acid carminic trong mẫu thử theo công thức:

(100 × A × 100) / (1,39 × W)

trong đó:

A = độ hấp thụ quang của dung dịch mẫu thử;

W = Khối lượng mẫu thử,tính bằng mg;

1,39 = độ hấp thụ quang của dung dịch acid carminic nồng độ 100 mg/1000 ml;

Nếu độ hập thụ quang đo được không nằm trong khoảng giá trị 0,65 - 0,75, chuẩn bị mẫu thử khác và hiệu chỉnh khối lượng mẫu thử thích hợp.

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 3, Azorubine; CI (1975): 14720

INS: 122

ADI = 0 - 4 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 4-hydroxy-3-(4-sulfon-1-naphthylazo)-1-naphthalensulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

dinatri 4-hydroxy-3-(4-sulfon-1-naphthylazo)-1-naphthalensulfonat.

Mã số C.A.S.

3567-69-9

Công thức hóa học

C₂₀H₁₂N₂Na₂O₇S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

502,44

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 1%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% tổng các acid 4-Amino-1-naphthalensulfonic và acid 4-hydroxy-1-naphthalensulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1 Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient từ 2% đến 100% với tốc độ tăng cố định 2%/phút.

6.3. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,5 - 0,6 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 12,56 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 9, Naphtol Rot S.; CI (1975): 16185

INS: 123

ADI = 0 - 0,5 mg/kg thể trọng

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm trinatri 3-hydroxy-4-(4-sulfon-1-naphthylazo)-2,7-naphthalendisulfonat và các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

trinatri 3-hydroxy-4-(4-sulfon-1-naphthylazo)-2,7-naphthalendisulfonat

Mã số C.A.S.

915-67-3

Công thức hóa học

C₂₀H₁₁N₂Na₃O₁₀S₃

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

604,48

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu nâu đỏ hoặc nâu đỏ sẫm.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 3%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% tổng các acid 4-amino-1-naphthalensulfonic;

acid 3-hydroxy-2,7-naphthalendisulfonic; acid 6-hydroxy-2-naphthalensulfonic; acid 7-hydroxy-1,3-naphthalendisulfonic và acid 7-hydroxy-1,3,6- naphthalen-trisulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1 Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 3; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm, sau 1 giờ khai triển.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2 đến 100% với tốc độ tăng cố định 4%/phút.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,7 - 0,8 g mẫu thử;

Đệm 10 g natri citrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 15,11 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 7, Cochineal Red A ; New Cochineal;

CI (1975): 16255

INS: 124

ADI = 0 - 4 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm trinatri d-2-hydroxy-1-(4-sulfon-1-naphthylazo)-6,8-naphthalendisulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Trinatri-2-hydroxy-1-(4-sulfon-1-naphthylazo)-6,8-naphthalendisulfonat

Mã số C.A.S.

2611-82-7

Công thức hóa học

C₂₀H₁₁N₂Na₃O₁₀S₃.1,5H₂O

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

631,51

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 20% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 1%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% tổng các acid 4-amino-1-naphthalensulfonic; acid 7-hydroxy-1,3-naphthalendisulfonic; acid 3-hydroxy-2,7-naphthalensulfonic; acid 6-hydroxy-2-naphthalensulfonic và acid 7-hydroxy-1,3,6-naphthalentrisulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Khôngđược quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Khôngđược quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 3; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm, sau 1 giờ khai triển.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2 đến 100% với tốc độ tăng cố định 2%/phút.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,7 - 0,8 g mẫu thử;

Đệm 10 g natri citrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 15,78 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 14, FD&C Red No. 3; CI (1975): 45430

INS 127

ADI = 0 - 0,1 mg/kg thể trọng

2. Định nghĩa

Chủ yếu là muối dinatri 9-(o-carboxyphenyl)-6-hydroxy-2,4,5,7-tetraiodo-3-isoxanthon monohydrat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Muối dinatri 9-(o-carboxyphenyl)-6-hydroxy-2,4,5,7-tetraiodo-3-isoxanthon monohydrat

Mã số C.A.S.

16423-68-0

Công thức hóa học

C₂₀H₆I₄Na₂O₅.H₂O

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

897,88

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước và trong ethanol

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 13% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Iod vô cơ

Không được quá 0,1% tính theo natri iodid.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Kẽm

Không được quá 50 mg/kg.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 4% (không bao gồm Fluorescein).

Fluorescein

Không được quá 20 mg/kg.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,2% Tri iodoresorcinol

Không được quá 0,2% acid 2-(2,4-dihydroxy-3,5-di-iodobenzoyl) benzoic

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2% đối với dung dịch mẫu thử pH < 7.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 87% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Iod vô cơ

Cân 1,0 g mẫu thử vào một cốc có mỏ 100 ml. Thêm 75 ml nước cất, dùng máy khuấy từ khuấy cho tan hoàn toàn. Cho điện cực đặc trưng cho iod và một điện cực so sánh vào dung dịch và đặt máy đo thế ở thang đo thích hợp. Đọc thế của hệ (mV).

Dùng buret thêm dung dịch bạc nitrat 0,001 M, đầu tiên mỗi lần thêm 0,5 ml, khi gần đến điểm tương đương (nhận biết bằng sự thay đổi điện thế sau mỗi lần thêm) giảm còn 0,1 ml/lần, để ổn định và đọc điện thế của hệ sau mỗi lần thêm (mV). Tiến hành chuẩn độ đến khi thêm dung dịch bạc nitrat 0,001 M mà không làm thay đổi điện thế dung dịch nhiều. Vẽ đường biểu thị sự phụ thuộc giữa điện thế dung dịch (mV) vào thể tích dung dịch bạc nitrat 0,001 M thêm vào. Điểm tương đương được xác định là điểm mà thể tích dung dịch bạc nitrat 0,001 M thêm vào tương ứng với độ dốc của đường đồ thị lớn nhất.

Hàm lượng natri iodid trong mẫu được tính = độ chuẩn x 0,015%.

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 5; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm. Chú ý: Không để bản mỏng sắc ký trực tiếp ra ngoài sánh sáng mặt trời

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật sắc ký cột với các điều kiện hấp thụ như sau:

Tri-iodoresorcinol: 0,079 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng 233 nm, trong môi trường acid.

Acid 2-(2,4-dihydroxy-3,5-di-iodobenzoyl) benzoic: 0,047 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng 348 nm, trong môi trường kiềm.

Fluorescein

Nguyên tắc:

Fluorescein được tách khỏi mẫu thử bằng sắc ký lớp mỏng (TLC) và so sánh với sắc ký đồ của Fluorescein chuẩn tại nồng độ tương ứng với giới hạn quy định.

Dung môi:

Methanol + nước + dung dịch amoniac (khối lượng riêng ~ 0,890) (500 ml + 400 ml + 100 ml).

Chuẩn bị mẫu:

Cân 1,0 g mẫu thử, hòa tan trong khoảng 50 ml dung môi và pha loãng đến đủ 100 ml.

Chuẩn:

Cân chính xác lượngFluorescein (đã tinh chế bằng cách kết tinh lại trong ethanol) tương đương với 1 g x hàm lượng các chất màu trong mẫu (xác định trong phần định lượng). Hòa tan trong nước (hoặc trong nước có 10 ml dung dịch amoniac có khối lượng riêng ~ 0,890 nếu sử dụng acid không có Fluorescein), pha loãng và định mức đến đủ 100 ml. Tiến hành pha loãng theo các bước liên tiếp như sau:

Hút 1ml pha loãng đến đủ 100 ml bằng nước.

Hút 1ml pha loãng đến đủ 100 ml bằng nước.

Hút 20 ml pha loãng đến đủ 100 ml bằng dung môi.

Dung môi sắc ký:

n-Butanol + nước + dung dịch amoniac (khối lượng riêng ~ 0,890) + ethanol (100 ml + 44 ml + 1 ml + 22,5 ml).

Tiến hành:

Lần lượt chấm cạnh nhau 25mL dung dịch thử và dung dịch chuẩn trên cùng 1 bản mỏng cellulose. Khai triển trong hệ dung môi sắc ký trong 16 giờ. Để khô bản mỏng. Soi dưới đèn UV và so sánh huỳnh quang của vết thử với vết chuẩn. Mật độ huỳnh quang của vết thử không được quá vết chuẩn.

Chú ý: không để bản mỏng ra ánh sáng mặt trời trực tiếp.

6.2. Định lượng

Cân 1 g (chính xác đến mg) mẫu thử, hòa tan trong 250 ml nước, chuyển vào một cốc 500 ml sạch, thêm 8,0 ml acid nitric 1,5 N, khuấy đều. Lọc qua phễu lọc thủy tinh xốp (độ xốp 3, đường kính 5 cm), chứa sẵn đũa thủy tinh và đã cân bì. Rửa cặn bằng acid nitric 0,5% đến khi dịch rửa không bị đục khi thử với dung dịch bạc nitrat (TS), sau đó với 30 ml nước cất. Sấy tại nhiệt độ 135±5 ^oC đến khối lượng không đổi. Cẩn thận phá cặn bằng đũa thủy tinh,để nguội trong bình hút ẩm và cân.

Xác định Chất không tan trong acid hydrocloric trong màu nhôm erythrosin

Hóa chất, thuốc thử:

Acid hydrocloric đặc

Acid hydrocloric 0,5% (tt/tt)

Dung dịch amoniac loãng (pha loãng 10 ml dung dịch amoniac có khối lượng riêng =0,890 bằng nước đến đủ 100 ml).

Tiến hành:

Cân khoảng 5 g (chính xác đến mg) mẫu thử vào cốc 500 ml. Thêm 250 ml nước và 60 ml acid hydrocloric đặc. Đun sôi để hòa tan nhôm trong khi đó erythrosin chuyển về dạng acid tự do, không tan trong acid. Lọc qua phễu lọc thủy tinh xốp số 4 đã cân bì. Rửa cặn với một lượng nhỏ acid hydrocloric 0,5% nóng, sau đó với nước cất nóng. Loại bỏ dịch rửa acid, lấy phễu thủy tinh xốp ra và rửa phễu bằng dung dịch amoniac loãng đến khi dịch rửa không có màu. Sấy tại 135 ^oC đến khối lượng không đổi. Cân phễu và tính khối lượng cặn còn lại và tính hàm lượng % so với khối lượng mẫu đã lấy.

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 10, Azogeranine; CI (1975): 18050

INS: 128

ADI = 0 - 1 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 8-acetamido-1-hydroxy-2-phenylazo-3,6-naphthalendisulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Dinatri 8-acetamido-1-hydroxy-2-phenylazo-3,6-naphthalendisulfonat

Mã số C.A.S.

3734-67-6

Công thức hóa học

C₁₈H₁₃N₃Na₂O₈S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

509,43

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 20% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Không được quá 2%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,3% tổng các acid 5-acetamido-4-hydroxy-2,7-naphthalen-2,7-disulfonic và acid 5-Amino-4-hydroxy-2,7-naphthalen-2,7-disulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 80% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật HPLC với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2 đến 100% với tốc độ tăng cố định 2%/phút.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,6 - 0,7 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 12,74 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Red 17, FD&C Red No. 40; CI (1975): 16035

INS: 129

ADI = 0 - 7 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 6-hydroxy-5-(2-methoxy-5-methyl-4-sulfon-phenylazo)-2-naphthalen-sulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Dinatri 6-hydroxy-5-(2-methoxy-5-methyl-4-sulfon-phenylazo)-2-naphthalen-sulfonat

Mã số C.A.S.

25956-17-6

Công thức hóa học

C₁₈H₁₄N₂Na₂O₈S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

496,43

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu đỏ sẫm.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Khôngđược quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Khôngđược quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Khôngđược quá 3%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Khôngđược quá 0,3% Natri 6-hydroxy-2-naphtalen sulfonat;

Khôngđược quá 0,2% acid 4-amino-5-methoxy-2-methyl-benzen-sulfonic;

Khôngđược quá 1,0% dinatri 6,6'-oxybis(2-naphthalen-sulfonat);

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Khôngđược quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Khôngđược quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1 Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; chiều cao của tuyến dung môi ~ 17 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng dưới các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient từ 0% đến 18% với tốc độ tăng cố định 1%/phút; 18 đến 62% với tốc độ tăng cố định 7%/phút, sau đó rửa giải tại 100%, tốc độ dòng 0,6 ml/phút.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 0,5 - 0,6 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 12,41 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

Indigocarmin; CI Food Blue 1, FD&C Blue No. 2; CI (1975): 73015

INS: 132

ADI = 0 - 5 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 3,3' -dioxo-[delta^2,2'-biindolin]-5,5'-disulfonat và dinatri 3,3'-dioxo-[delta^2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Dinatri 3,3' -dioxo-[delta^2,2'-biindolin]-5,5'-disulfonat

Mã số C.A.S.

860-22-0 (đồng phân 5,5')

Công thức hóa học

C₁₆H₈N₂Na₂O₈S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

466,36

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu xanh lam.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Khôngđược quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Khôngđược quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Các chất màu phụ

Khôngđược quá 1% (không bao gồm dinatri 3,3'-dioxo-[delta^2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat).

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,5% tổng các acid isatin-5-sulfonic; acid 5-sulfoanthranilic và acid anthranilic

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Khôngđược quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Khôngđược quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

Không được quá 18%dinatri 3,3'-dioxo-[delta^2,2'-biindolin]-5,7'-disulfonat.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 3; Chiều cao tuyến dung môi ~ 17 cm.

Chú ý 1: Đồng phân 5,7' được tách ra là một vùng màu xanh lớn ngay trước vết chính màu xanh. Không tính vùng này vào khi xác định các chất màu phụ.

Chú ý 2: 15 ml dung dịch natri hydro carbonat sử dụng trong quy trình chung được thay thế bằng dung dịch acid hydrocloric 0,05 N để tránh sự phân hủy xảy ra khi indigo sulfon hóa trong môi trường kiềm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng với các điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient từ 2 đến 100%, sau đó tiếp tục rửa giải tại 100%.

Các chất có thể chiết bằng ether

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Cân 2 g mẫu thử thay cho hướng dẫn cân 5 g mẫu trong phần các phương pháp chung.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 1,0 - 1,1 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 23,32 mg các chất màu (D).

Xác định đồng phân bằng sắc ký giấy:

Tiến hành theo các điều kiện hướng dẫn cho phần xác định hàm lượng các chất màu phụ. Cắt vết sắc ký tương ứng của đồng phân trên sắc ký đồ, theo hướng dẫn cắt vết màu phụ. Chiết vào dung môi và đo hấp thụ quang tại S_max của nó. Tiến hành đo mẫu trắng song song tại cùng điều kiện. Sử dụng 0,1 ml dung dịch mẫu thử làm chuẩn, chấm lên bản giấy hình chữ nhật 18 cm x 0,7 cm.

Hàm lượng (%) đồng phân trong mẫu được tính như sau

% = [A / A_s] x 20% x [D / 100]

Trong đó:

A là độ hấp thụ (đã hiệu chỉnh với mẫu trắng) của đồng phân.

A_s là độ hấp thụ (đã hiệu chỉnh với mẫu trắng) của chuẩn.

D là hàm lượng tổng chất màu trong mẫu.

Xác định đồng phân bằng HPLC:

Đồng phân 5,7' được tách bằng HPLC với điều kiện để tách các chất màu phụ nêu trên và định lượng.

1. Tên khác, chỉ số

CI Food Blue 2, FD&C Blue No. 1; CI (1975): 42900

INS: 133

ADI = 0 - 1 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm dinatri 3-[N-ethyl-N-[4-[[4-[N-ethyl-N-(3-sulfonbenzyl)-amino] phenyl] (2-sulfonphenyl)methylen]-2,5-cyclohexadien-1-yliden] amonimethyl] benzensulfonat và các đồng phân của nó cùng các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Dinatri 3-[N-ethyl-N-[4-[[4-[N-ethyl-N-(3-sulfonbenzyl)-amino] phenyl] (2-sulfonphenyl)methylen]-2,5-cyclohexadien-1-yliden] amonimethyl] benzensulfonat.

Dinatri I-[4-(N-ethyl-3-sulfonatobenzylamino)phenyl]-I- [4-(N-ethyl-3-sulfonatobenzyliminio)cyclohexa-2,5-dienyli-den]toluen-2-sulfonat (Tên hóa học khác).

Mã số C.A.S.

3844-45-9

Công thức hóa học

C₃₇H₃₄N₂Na₂O₉S₃

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

792,86

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu xanh lam.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, ít tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Khôngđược quá 15% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Khôngđược quá 0,2%.

Chì

Không được quá 2 mg/kg.

Crom

Không được quá 50 mg/kg.

Các chất màu phụ

Khôngđược quá 6%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 1,5% tổng các acid 2-; 3- và 4-formylbenzensulfonic.

Không được quá 0,3% acid 3-[[N-ethyl-N-(4-sulfophenyl) amino] methyl] benzensulfonic.

Leuco base

Không được quá 5%.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Khôngđược quá 0,01% tính theo anilin.

Các chất có thể chiết bằng ether

Khôngđược quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 85% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện sau: Dung môi khai triển là dung môi số 4; Khai triển dung môi trong 20 giờ.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật sắc ký cột với các điều kiện hấp thụ như sau:

acid 3-formylbenzensulfonic: 0,0495 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng 246 nm, trong HCl loãng.

acid 3-[[N-ethyl-N-(4-sulfophenyl) amino] methyl] benzensulfonic: 0,078 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng 277 nm, trong dung dịch amoniac loãng.

Leuco base

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4 - Cân 120±5 mg mẫu thử và tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định Leuco base trong chất màu nhóm Triarylmethan sulfon hóa; Độ hấp thụ riêng (a) = 0,164 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng ~ 630 nm; tỷ số = 0,9706.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 1,8 - 1,9 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 39,65 mg các chất màu (D).

1. Tên khác, chỉ số

Magnesium chlorophyll, Magnesium phaeophytin;

Clorophyllin; C.I. Natural Green 3; C.I. (1975): 75810;

INS 140

ADI "không giới hạn" .

2. Định nghĩa

Thu được bằng cách chiết cỏ, cỏ linh lăng, tầm ma và các nguyên liệu thực vật khác với dung môi; Sản phẩm sau khi đã loại dung môi ở dạng kết hợp với magnesi, có thể loại hoàn toàn hoặc 1 phần từ clorophyll để thu được phaeophytin tương ứng; Thành phần màu chính là các phaeophytin và magnesi clorophyll. Sản phẩm chiết sau khi loại dung môi chứa các chất màu khác như carotenoid, sáp và chất béo có nguồn gốc từ nguyên liệu. Chỉ được sử dụng những dung môi sau để chiết: aceton, dicloromethan, methanol, ethanol, propan-2-ol và hexan.

Tên hóa học

Các chất màu chính là:

Phytyl (13²R,17S,18S)-3-(8-ethyl-13²-methoxycarbonyl-2,7,12,18-tetramethyl-13'-oxo-3-vinyl-13¹-13²-17,18-tetrahydrocyclopenta [at]-prophylrin-17-yl) propionat (Pheophytin a), hoặc phức magnesi (Clorophyll a).

Phytyl (13²R,17S,18S)-3-(8-ethyl-7-formyl-13²-methoxycarbonyl-2,12,18-trimethyl-13'-oxo-3-vinyl-13¹-13²-17,18-tetrahydro-cyclopenta [at]-prophylrin-17-yl) propionat, (Pheophytin b), hoặc phức magnesi (Clorophyll b).

Mã số C.A.S.

Phaeophytin a, phức magnesi: 479-61-8

Phaeophytin b, phức magnesi: 519-62-0

Công thức hóa học

Phức magnesi phaeophytin a (Clorophyll a): C₅₅H₇₂MgN₄O₅

Phaeophytin a: C₅₅H₇₄N₄O₅

Phức magnesi phaeophytin b (Clorophyll a): C₅₅H₇₀MgN₄O₆

Phaeophytin b: C₅₅H₇₂N₄O₆

Công thức cấu tạo

Trong đó:

X = CH₃ đối với các hợp chất "a"

X = CHO đối với các hợp chất "b".

Mất Mg sẽ chuyển dạng từ clorophyll thành phaeophytin

Khối lượng phân tử

Phức magnesi phaeophytin a (Clorophyll a): 893,51

Phaeophytin a: 871,22

Phức magnesi phaeophytin (Clorophyll a): 907,49

Phaeophytin : 885,20

3. Cảm quan

Chất rắn dạng sáp có màu từ xanh oliu đến xanh lục thẫm tùy thuộc vào lượng magnesi kết hợp.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Không tan trong nước; tan trong cồn,diethyl ether; cloroalkan, hydrocarbon và dầu không bay hơi.

Sắc ký lớp mỏng

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần phương pháp thử)

5.2. Độ tinh khiết

Dungmôi tồn dư

Aceton, methanol, ethanol, propan-2-ol, hexan: Không được quá 50 mg/kg, đơn chất hoặc kết hợp.

Dicloromethan: Không được quá 10 mg/kg

Arsen

Không được quá 3 mg/kg.

(Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol.4 - Phương pháp II).

Chì

Không được quá 5 mg/kg.

(Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4. Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol.4 phần các phương pháp phân tích công cụ).

5.3. Hàm lượng

Tổng hàm lượng các phaeophytin và các phức magnesi của nó khôngthấp hơn 10%.

6. Phương pháp thử

6.1. Định tính

Sắc ký lớp mỏng

Chấm dung dịch mẫu thử 1/20 trong cloroform lên bản mỏng Silica 60C thành 1 vạch dài 2 cm. Sau khi bản mỏng khô, khai triển bản mỏng trong hệ dung môi gồm 50% hexan, 45%

 cloroform và 5% ethanol (thông thường cloroform với độ tinh khiết thuốc thử đã chứa sẵn 2% ethanol để làm ổn định. 5% ethanol là không tính đến lượng ethanol có sẵn này) đến khi tuyến dung môi đạt 15 cm cách điểm xuất phát. Để dung môi bay hơi, sau đó quan sát các vết riêng biệt và xác định vết tương ứng với cấu tử quan tâm thông qua R_f và màu. Giá trị R_f gần đúng và màu của các vết như sau:

phaeophytin a: 0,77; màu xám/nâu

phaeophytin b: 0,75; màu vàng/nâu

Clorophyll a: 0,50; màu xanh lam/xanh lục

Clorophyll b: 0,63; màu vàng/xanh lục

Ngoài ra còn quan sát thấy các vết củab-caroten tại R_f 0,81 và xanthophyll tại R_f 0,47 và 0,23.

6.2. Độ tinh khiết

Dungmôi tồn dư

Thử theohướngdẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

Xác định bằnh Sắc ký khí hoặc bằng phương pháp cất cuốn (chuyên luận Xác định dung môi tồn dư) hoặc phân tích không gian hơi (chuyên luận Thử giới hạn dung môi tồn dư).

Arsen

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol.4

- Phương pháp II.

Chì

 - Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol.4 phần các phương pháp phân tích công cụ).

6.1. Định lượng

Cân khoảng 100 mg (chính xác đến mg) mẫu thử, hòa tan trong diethyl ether đến đủ 100 ml. Lấy 2 ml dung dịch này, pha loãng với diethyl ether vừa đủ 25 ml. Độ hấp thụ quang của mẫu tại nồng độ này khi đo tại bước sóng 660,4 nm không được vượt quá 0,7 so với thang đo độ hấp thụ.

Đo độ hấp thụ quang (A) của dung dịch này trong cuvet 1 cm so với mẫu trắng là diethyl ether tại bước sóng 660,4 nm; 642,0 nm; 667,2 nm; 654,4 nm. (các bước sóng này lần lượt là cực đại hấp thụ trong diethyl ether của clorphyll a; clorophyll b; phaeophtin a và đồng phaeophytin b, tương ứng). Ngoài ra đo thêm tại bước sóng 649,8 nm và 628,2 nm. Phần dung dịch đã pha loãng còn lại, thêm vào 1 tinh thể acid oxalic, hòa tan và lắc đều. Đo lại độ hấp thụ quang của dung dịch tại các bước sóng đã cho. "dA" là sự chênh lệch độ hấp thụ quang của dung dịch đo tại cùng bước sóng trước và sau khi thêm acid oxalic.

 Tính nồng độ từng chất (mmol/L) theo các phương trình sau:

Clorophyll a = 17,7dA (660,4 nm) + 7,15dA (642,0 nm) Clorophyll b = 19,4dA (642,0 nm) - 2,92dA (660,4 nm) Phaeophytin a = -4,89 A (649,8 nm) + 0,0549 A (628,2 nm) +18,7 A (667,2 nm) + 0,0575 A (654,4 nm) - clorophyll a Phaeophytin b = -71,0 A (649,8 nm) + 2,51 A (628,2 nm) - 13,5 A (667,2 nm) + 84,3 A (654,4 nm) - clorophyll b

Chuyển từmmol/L sang hàm lượng % theo phương trình sau:   

1. Tên khác, chỉ số

Copper chlorophyllin, copper phaeophytin

C.I. Natural Green 3; C.I. (1975) No. 75810;

INS: 141i

ADI = 0 - 15 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Thu được khi thêm muối đồng hữu cơ vào sản phẩm thu được khi chiết cỏ, cỏ linh lăng, tầm ma và các nguyên liệu thực vật khác với dung môi; Sản phẩm sau khi đã loại dung môi chứa các chất màu khác như carotenoid cũng như sáp và chất béo. Chất màu chính là đồng phaeophytin. Chỉ được sử dụng những dung môi sau để chiết: aceton, dicloromethan, methanol, ethanol, propan-2-ol và hexan.

Tên hóa học

Chất màu chính ở dạng acid của nó là

[Phytyl (13²R, 17S, 18S)-3-(8-ethyl-13²-methoxycarbonyl-2,7,12,18-tetramethyl-13-oxo-3-vinyl-13¹, 13²,17,18-tetrahydroxypenta[at]-prophyrin-17-yl) propionat] đồng II (Đồng phaeophytin a)

[Phytyl (13²R, 17S, 18S)-3-(8-ethyl-7-formyl-13²-methoxycarbonyl-2,12,18-trimethyl-13-oxo-3-vinyl-13¹, 13²,17,18-tetrahydroxypenta[at]-prophyrin-17-yl) propionat] đồng II (Đồng phaeophytin b).

Mã số C.A.S

65963-40-8

Công thức hóa học

Đồng phaeophytin a (dạng acid): C₅₅H₇₂CuN₄O₅

Đồng phaeophytin b (dạng acid): C₅₅H₇₀CuN₄O₆

Công thức cấu tạo

Trong đó:

X = CH₃ đối với hợp chất "a"

X = CHO đối với hợp chất "b"

Khối lượng phân tử

Đồng phaeophytin a: 932,75

Đồng phaeophytin b: 943,73

3. Cảm quan

Chất rắn dạng sáp có màu từ xanh lục đến xanh lục thẫm tùy thuộc vào nguồn nguyên liệu.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Tính chất

5.1. Định tính

Độ tan

Không tan trong nước; tan trong cồn,diethyl ether; cloroalkan, hydrocarbon và dầu không bay hơi.

Quang phổ

A (1%, 1 cm) của mẫu thử trong cloroform, đo tại 405 nm không được thấp hơn 54.

Sắc ký lớp mỏng

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần phương pháp thử).

5.2. Độ tinh khiết

Dung môi tồn dư

Aceton, methanol, ethanol, propan-2-ol, hexan: Không được quá 50 mg/kg, đơn chất hoặc hợp chất.

Dicloromethan: Không được quá 10 mg/kg.

Đồng tự do có thể ion hóa

Không được quá 200 mg/kg.

Đồng tổng số

Không được quá 8% tính theo tổng số đồng phaeophytin.

Arsen

Không được quá 3 mg/kg.

Chì

Không được quá 5 mg/kg.

5.3. Hàm lượng

Khôngthấp hơn 10%tổng số đồng phaeaphytin.

6. Phương pháp thử

5.1. Định tính

Sắc ký lớp mỏng

Chấm dung dịch mẫu thử 1/20 trong cloroform lên bản mỏng Silica 60C thành 1 vạch dài 2 cm. Sau khi bản mỏng khô, khai triển bản mỏng trong hệ dung môi gồm 50% hexan, 45% cloroform và 5% ethanol (thông thường cloroform với độ tinh khiết thuốc thử đã chứa sẵn 2% ethanol để làm ổn định. 5% ethanol là chưa tính đến lượng ethanol có sẵn này) đến khi tuyến dung môi đạt 15 cm cách điểm xuất phát. Để dung môi bay hơi, sau đó quan sát các vết riêng biệt và xác định vết tương ứng với cấu tử quan tâm thông qua R_f và màu. Giá trị R_f gần đúng và màu của các vết như sau:

Đồng phaeophytin a: 0,5; màu xanh lục

Đồng phaeophytin b: 0,73; màu vàng/xanh lục

Ngoài ra còn quan sát thấy các vết củab-caroten tại R_f 0,81 và xanthophyll tại R_f 0,47 và 0,23.

5.2. Độ tinh khiết

Dung môi tồn dư

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Xác định bằnh Sắc ký khí hoặc bằng phương pháp cất cuốn (chuyên luận Xác định dung môi tồn dư) hoặc phân tích không gian hơi (chuyên luận Thử giới hạn dung môi tồn dư).

Đồng tự do có thể ion hóa

Cân khoảng 1 g (chính xác đến mg) mẫu thử và hòa tan trong 20 ml dầu lạc, đun nóng nhẹ cho tan hoàn toàn. Thêm chính xác 200 ml nước, khuấy bằng máy khuấy từ, và điều chỉnh tới pH 3,0 bằng cách thêm cẩn thận acid hydrocloric 0,5 N (tránh thêm quá nhanh). Để yên hỗn hợp trong 10 phút. Nếu cần, điều chỉnh lại tới pH 3,0 bằng cách thêm cẩn thận acid hydrocloric 0,5 N. Chuyển sang phễu tách và để yên 20 phút. Lọc lớp nước qua giấy lọc Whatman No. 50, bỏ 10 ml dịch lọc đầu. Dùng dung dịch này để phân tích đồng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử - JECFA monograph 1-Vol.4.

Đồng tổng số

Cân khoảng 0,1 g (chính xác đến mg) mẫu thử, cho vào đĩa silica, nung ở nhiệt độ không quá 500 ºC, tới khi loại đi toàn bộ than; làm ẩm tro bằng một hoặc hai giọt acid sulfuric đặc và tro hóa lại. Hòa tan tro bằng cách đun sôi 3 lần, mỗi lần với 5 ml acid hydrocloric 10% (kl/kl), lọc dịch acid thu được sau mỗi lần thêm acid qua cùng một phễu giấy lọc nhỏ vào bình định mức 100 ml. Để nguội, và thêm nước tinh khiết tới vạch. Dùng dung dịch này để phân tích đồng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử - xem JECFA monograph 1-Vol.4.

Arsen

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1 - Vol.4

- Phương pháp II.

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol.4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

6.3. Định lượng

Cân khoảng 100 mg (chính xác đến mg) mẫu thử, hòa tan trong diethyl ether đến đủ 100 ml. Lấy 2 ml dung dịch này, pha loãng với diethyl ether vừa đủ 25 ml. Độ hấp thụ quang của mẫu tại nồng độ này khi đo tại bước sóng 660,4 nm không được vượt quá 0,7 so với thang đo độ hấp thụ.

Đo độ hấp thụ quang (A) của dung dịch này trong cuvet 1 cm so với mẫu trắng là diethyl ether tại bước sóng 667,2 nm; 654,4 nm; 649,8 nm và 628,2 nm. (hai bước sóng sau là cực đại hấp thụ trong diethyl ether của đồng phaeophtin a và đồng phaeophytin b, tương ứng).

 Tính nồng độ từng chất (mmol/L) theo các phương trình sau:

Đồng phaeophytin a = 45,6 A (649,8 nm) - 2,75 A (628,2 nm) + 3,10 A (667,2 nm) - 35,4 A (654,4 nm)

Đồng phaeophytin b = -8,46 A (649,8 nm) + 20,7 A (628,2 nm) - 1,69 A (667,2 nm) + 5,13 A (654,4 nm)

Chuyển từmmol/L sang hàm lượng % theo phương trình sau:

1. Tên khác, chỉ số

Natri đồng clorophyllin; kali đồng clorophyllin

Chlorophyllins, C.I. (1975) No. 75810;

INS 141ii

ADI = 0 -15 mg/kg thể trọng.

2. Định nghĩa

Muối kiềm của đồng Clorophyllin thu được khi thêm đồng vào sản phẩm thu được khi xà phòng hóa dịch chiết dung môi từ cỏ, cỏ linh lăng, tầm ma và các nguyên liệu thực vật khác; quá trình xà phòng hóa có thể loại các nhóm ester methyl và cyclophytol và có thể tách đôi một phần vòng pentenyl; sau khi thêm đồng vào clorophyllin đã tinh chế, nhóm acid bị trung tính hóa tạo thành dạng muối của kali và/hoặc natri; sản phẩm thương mại có thể ở dạng dung dịch nước hoặc bột khô. Chỉ được sử dụng những dung môi sau để chiết: aceton, dicloromethan, methanol, ethanol, propan-2-ol và hexan.

Tên hóa học

Chất màu chính ở dạng acid của nó là

3-(10-Carboxylato-4-ethyl-1,3,5,8-tetramethyl-9-oxo-2-vinylphorbin-7-yl) propionat, phức đồng (Đồng clorophyllin a)

3-(10-carboxylato-4-ethyl-3-formyl-1,5,8-trimethyl-9-oxo-2-vinylphorbin-7-yl) propionat, phức đồng (Đồng clorophyllin b)

Tùy thuộc vào mức độ thủy phân vòng cyclopentenyl có thể tách đôi với sản phẩm thu được với chức carboxyl thứ ba.

Công thức hóa học

Đồng clorophyllin a (dạng acid): C₃₄H₃₂CuN₄O₅

Đồng clorophyllin b (dạng acid): C₃₄H₃₀CuN₄O₆

Công thức cấu tạo

Trong đó:

X = CH₃ đối với hợp chất "a"

X = CHO đối với hợp chất "b"

M = Kali và/hoặc natri

Khối lượng phân tử

Đồng clorophyllin a: 640,20

Đồng clorophyllin b: 654,18

Mỗi chất có thể tăng tới 18 Dalton nếu vòng cyclopentenyl tách đôi.

3. Cảm quan

Dung dịch màu lá cây sẫm hoặc bột xanh lá cây sẫm tới xanh lam/đen.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước; rất khó tan trong cồn thấp độ, keton vàdiethyl ether; không tan trong cloroalkan, hydrocarbon và một số dầu không bay hơi.

Quang phổ

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử)

Đồng

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử)

Natri

Phải có phản ứng đặc trưng của natri.

Kali

Phải có phản ứng đặc trưng của kali.

5.2. Độ tinh khiết

Phẩm màu kiềm

Đạt yêu cầu (mô tả trong phần Phương pháp thử)

Dungmôi tồn dư

Aceton, methanol, ethanol, propan-2-ol, hexan: Không được quá 50 mg/kg, đơn chất hoặc kết hợp.

Dicloromethan: Không được quá 10 mg/kg

Đồng tự do có thể ion hóa

Không được quá 200 mg/kg.

Đồng tổng số

Không được quá 8% tính theo đồng phaeophytin tổng số.

Arsen

Không được quá 3 mg/kg.

Chì

Không được quá 5 mg/kg.

5.3. Hàm lượng

Khôngthấp hơn 95%đồng Clorophyllin tổng số sau khi sấy khôtại100 ºC trong 1 giờ.

6. Phương pháp thử

6.1 Định tính

Quang phổ

A (1%, 1 cm) của mẫu thử (đã sấy khô ở 100 ºC trong 1 giờ), đo tại 405 nm trong dung dịch đệm phosphat pH 7,5 không được nhỏ hơn 540.

Đồng

Hòa tan tro sulfat của mẫu thử (Cân 1 g mẫu, Phương pháp I) trong 10 ml acid hydrocloric loãng (TS) bằng cách làm nóng trong bể cách thủy. Lọc nếu dung dịch đục, và pha loãng với nước tới 10 ml. Sử dụng dung dịch này là dung dịch thử cho các phép thử sau:

Cho dung dịch amoniac (TS) vào 5 ml dung dịch thử để kiềm hóa. Dung dịch phải xuất hiện màu xanh lam.

Cho 0,5 ml dung dịch natri diethyldithiocarbamat 1/1000 vào 5 ml dung dịch thử.Dung dịch phải xuất hiện tủa nâu.

Natri

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4 -Chuẩn bị dung dịch được mô tả trong chuyên luận Định tính đồng.

Kali

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4 -Chuẩn bị dung dịch được mô tả trong chuyên luận định tính đồng.

6.2 Độ tinh khiết

Phẩm màu kiềm

Lấy 5 ml dung dịch mẫu thử 0,5% trong nước vào ống nghiệm, thêm 1 ml acid hydrocloric 1 N và 5 ml diethyl ether. Lắc kỹ và để phân lớp. Màu của lớp ether không được đậm hơn màu xanh lá cây nhạt.

Dungmôi tồn dư

Xác định bằnh Sắc ký khí hoặc bằng phương pháp cất cuốn (chuyên luận Xác định dung môi tồn dư) hoặc phân tích không gian hơi (chuyên luận Thử giới hạn dung môi tồn dư).(Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4)

Đồng tự do có thể ion hóa

Cân khoảng 1 g (chính xác đến mg) mẫu thử và hòa tan trong 20 ml dầu lạc, đun nóng nhẹ. Thêm chính xác 200 ml nước, khuấy bằng máy khuấy từ, và điều chỉnh tới pH 3,0 bằng cách thêm cẩn thận acid hydrocloric 0,5 N (tránh thêm quá nhanh). Để yên hỗn hợp trong 10 phút. Nếu cần, điều chỉnh lại tới pH 3,0 bằng cách thêm cẩn thận acid hydrocloric 0,5 N. Chuyển sang phễu tách và để yên 20 phút. Lọc lớp nước qua giấy lọc Whatman No. 50, bỏ 10 ml dịch lọc đầu. Dùng dung dịch này để phân tích đồng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử (xem JECFA monograph 1-Vol.4).

Đồng tổng số

Cân khoảng 0,1 g (chính xác đến mg) mẫu thử, cho vào đĩa silica, nung ở nhiệt độ không quá 500 ºC, tới khi loại đi toàn bộ than; làm ẩm tro bằng một hoặc hai giọt acid sulfuric đặc và tro hóa lại. Hòa tan tro bằng cách đun sôi 3 lần, mỗi lần với 5 ml acid hydrocloric 10% (kl/kl), lọc dịch acid thu được sau mỗi lần thêm acid qua cùng một phễu giấy lọc nhỏ vào bình định mức 100 ml. Để nguội, và thêm nước tinh khiết tới vạch. Dùng dung dịch này để phân tích đồng bằng quang phổ hấp thụ nguyên tử (xem JECFA monograph 1-Vol.4).

Arsen

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4- Phương pháp II

Chì

Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4. Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol.4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

6.3. Định lượng

Cân khoảng 1 g (chính xác đến mg) mẫu thử, đã sấy khô trước ở 100 ºC trong 1 giờ, sau đó hòa tan trong 20 ml dung dịch đệm phosphat (pH 7,5) và pha loãng tới 1000 ml bằng nước cất. Lấy 10 ml dung dịch này và pha loãng tới 100 ml bằng dung dịch đệm phosphat (pH 7,5). Đo mật độ quang của dung dịch này (0,001% kl/tt) bằng máy quang phổ thích hợp, sử dụng cuvet đo 1 cm và độ rộng khe 0,10 mm ở 403-406 nm, ghi cực đại trong khoảng đó.

Hàm lượng (%) natri đồng clorophyllin được tính theo công thức theo công thức sau:

Mật độ quang´10⁴

--------------------------------------

565´khối lượng mẫu thử (g)

Quy ước: natri đồng clorophyllin tinh khiết 100% có độ hấp thụ riêng là 565.

1. Tên khác, chỉ số

CI food green 4, food green S; CI (1975): 44090

INS: 142

ADI “không xác định”.

2. Định nghĩa

Chủ yếu gồm natri N-[4-][[4-(dimethylamino) phenyl] (2-hydroxy-3,6 disulfo-1-naphtalenyl) methylen]-2,5-cyclohexadien-1-ylidenen-N-methylmetanamini và các chất màu phụ cùng với NaCl và (hoặc) Na₂SO₄ là các thành phần không màu chính.

Có thể chuyển thành chất màu nhôm (aluminium lake) tương ứng, trong trường hợp này áp dụng quy định chung đối với các loại chất màu nhôm.

Tên hóa học

Natri N-[4-[[4-(dimethylamino) phenyl](2-hydroxy-3,6 disulfo-1- naphtalenyl) methylen]-2,5-cyclohexadien-1-yliden]-N methylmetanamini;

hoặc Natri 5-[4-dimethylamino-l-(4-dimethyliminiocyclohexa-2,5-dienyliden) benzyl]-6-hydroxy-7-sulfonat-naphtalen-2-sulfonat.

Mã số C.A.S.

860-22-0

Công thức hóa học

C₂₇H₂₅N₂NaO₇S₂

Công thức cấu tạo

Khối lượng phân tử

576,63

3. Cảm quan

Dạng bột hoặc hạt màu xanh lục đậm.

4. Chức năng

Phẩm màu.

5. Yêu cầu kỹ thuật

5.1. Định tính

Độ tan

Tan trong nước, khó tan trong ethanol.

Định tính các chất màu

Phải có phản ứng đặc trưng của chất màu.

5.2. Độ tinh khiết

Giảm khối lượng khi làm khô tại 135 ^oC

Không được quá 20% cùng với clorid và sulfat tính theo muối natri.

Chất không tan trong nước

Không được quá 0,2%.

Chì

 Không được quá 2 mg/kg.

Crom

 Không được quá 50 mg/kg.

Các chất màu phụ

 Không được quá 1%.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

Không được quá 0,1% rượu 4, 4’-bis (dimethylamino) benzhydric.

Không được quá 0,1% 4, 4’-bis (dimethylamino) benzophenon,

Không được quá 0,2% acid 3-Hydroxynaphtalen-2,7-disulfonic.

Các amin thơm bậc nhất không sulfon hoá

Không được quá 0,01% tính theo anilin.

Leuco base

Không được quá 5,0%.

Các chất có thể chiết bằng ether

Không được quá 0,2%.

5.3.Hàm lượng

Không được thấp hơn 80% tổng các chất màu.

6.Phương pháp thử

6.1. Độ tinh khiết

Chì

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4.

- Sử dụng kỹ thuật hấp thụ nguyên tử thích hợp với hàm lượng chỉ định để xác định. Lựa chọn cỡ mẫu thử và phương pháp chuẩn bị mẫu dựa trên nguyên tắc của phương pháp mô tả trong JECFA monograph 1-Vol. 4 phần các phương pháp phân tích công cụ.

Các chất màu phụ

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng điều kiện như sau: Dung môi khai triển là dung môi số 2, chiều cao từ vạch xuất phát tới tuyến dung môi khoảng 17 cm.

Các chất hữu cơ ngoài chất màu

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Sử dụng kỹ thuật sắc ký lỏng với điều kiện như sau: HPLC rửa giải gradient 2% đến 100% với tốc độ tăng cố định 2%/phút.

Leuco base

- Thử theo hướng dẫn tại JECFA monograph 1-Vol. 4

- Cân chính xác 110±5 mg mẫu vàtiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận thử Leuco base trong chất màu Triarylmethan sulfon hóa. Độ hấp thụ riêng (a)=0,1725 mgL^-1cm^-1 tại bước sóng khoảng 634 nm. Tỷ số = 0,9600.

6.2. Định lượng

Tiến hành theo hướng dẫn trong chuyên luận xác định tổng hàm lượng bằng chuẩn độ với Titan (III) clorid (trong JECFA monograph 1-Vol. 4) như sau:

Cân 1,4 - 1,5 g mẫu thử;

Đệm 15 g natri hydrotartrat;

Mỗi ml TiCl₃ 0,1 N tương đương với 28,83 mg các chất màu (D).