Tiêu chuẩn TCVN 14389:2025 Phân bón - Định lượng Bacillus laterosporus bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc và PCR

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14389:2025 về định lượng Bacillus laterosporus trong phân bón

Ngày 18/09/2025, Bộ Khoa học và Công nghệ đã chính thức công bố Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14389:2025 quy định phương pháp định lượng Bacillus laterosporus trong sản phẩm phân bón vi sinh vật. Tiêu chuẩn này sẽ có hiệu lực ngay từ ngày công bố.

Tiêu chuẩn này áp dụng cho việc xác định số lượng Bacillus laterosporus bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc trên môi trường thạch và khẳng định sự hiện diện của vi khuẩn này qua phản ứng chuỗi polymerase (PCR), dựa trên gen đặc hiệu cpbA.

Phương pháp định lượng Bacillus laterosporus

Nguyên tắc của phương pháp này dựa trên việc đếm số lượng khuẩn lạc Bacillus laterosporus phát triển trong môi trường thạch MYP (Mannitol Egg Yolk Polymyxin), kết hợp với việc xác định hình thái tế bào và bào tử cùng sự hiện diện của gen cpbA.

Yêu cầu về môi trường và hóa chất

Môi trường và hóa chất sử dụng cần đảm bảo tinh khiết, chuyên dụng cho phân tích vi sinh và phải được chuẩn bị đúng quy trình. Ví dụ, như môi trường thạch MYP yêu cầu thành phần bao gồm cao thịt bò, tryptone, D-mannitol, sodium chloride và màu đỏ phenol.

Quy trình thực hiện

1. Lấy mẫu: Mẫu thử cần được lấy theo tiêu chuẩn và giữ nguyên vẹn khi gửi đến phòng thí nghiệm.
2. Chuẩn bị mẫu thử: Cân hoặc hút mẫu và hòa với dung dịch pha loãng, sau đó ủ để diệt tế bào không cần thiết.
3. Cấy mẫu: Cấy dung dịch mẫu vào đĩa chứa môi trường thạch MYP, ủ để phát triển khuẩn lạc.
4. Đếm và nhận diện khuẩn lạc: Khuẩn lạc Bacillus laterosporus có màu hồng nhạt và được xác nhận qua phép thử khẳng định.
5. Phép thử khẳng định: Xác định khuẩn lạc thông qua nhuộm Gram, đặc điểm bào tử và gen cpbA.

Biểu thị kết quả

Kết quả định lượng sẽ được tính theo đơn vị hình thành khuẩn lạc trên gam (CFU/g) hoặc mililit (CFU/mL). Kết quả phải phản ánh số lượng khuẩn lạc Bacillus laterosporus có trong mẫu thử và được báo cáo đầy đủ theo quy định.

Tiêu chuẩn TCVN 14389:2025 nhằm mục đích tạo cơ sở cho việc kiểm soát chất lượng sản phẩm phân bón vi sinh vật, bảo đảm an toàn và hiệu quả trong sản xuất nông nghiệp.