Tiêu chuẩn ngành 28TCN 202:2004 Chẩn đoán bệnh virus đốm trắng trên các loài thuộc họ tôm he

Quy trình chẩn đoán bệnh virus đốm trắng trên tôm bằng kỹ thuật PCR

Ngày 01/04/2004, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn đã ban hành Tiêu chuẩn ngành 28TCN 202:2004 quy định quy trình chẩn đoán bệnh virus đốm trắng trên các loài tôm thuộc họ tôm he bằng kỹ thuật Polymerase Chain Reaction (PCR). Văn bản này có hiệu lực từ ngày ban hành.

Quy trình này được áp dụng để phát hiện virus gây hội chứng đốm trắng (bệnh virus đốm trắng) ở tôm bố mẹ, tôm giống và tôm nuôi thương phẩm, đồng thời có thể áp dụng cho các loài giáp xác khác.

Nội dung quy trình

1. Nguyên tắc và phương pháp: Quy trình sử dụng kỹ thuật PCR để khuếch đại và phát hiện trình tự ADN của virus gây bệnh. Kỹ thuật này gồm các bước như biến tính ADN, bắt cặp mồi và tổng hợp mạch mới.

2. Chuẩn bị mẫu:

• Số lượng mẫu: Sử dụng 100 cá thể tôm hậu ấu trùng, 100 mg mẫu từ phiến mang tôm bố mẹ hoặc tôm nuôi thương phẩm.
• Mẫu cần bảo quản trong cồn 95% ngay sau khi lấy mẫu.

1. Thiết bị và hóa chất:

• Bao gồm các thiết bị như máy khuấy, máy ly tâm, máy luân nhiệt, và dụng cụ điện di.
• Hóa chất gồm mồi đặc hiệu cho virus, dung dịch để tách chiết ADN, cùng với các dị vật cần thiết cho quy trình PCR.

1. Tiến hành phương pháp:

• Mẫu tôm được xử lý và nghiền với dung dịch tách chiết ADN.
• Tiến hành hai bước khuếch đại PCR để phát hiện virus với cặp mồi đặc hiệu.
• Sản phẩm khuếch đại được điện di trên thạch agarose để kiểm tra kết quả.

1. Đọc kết quả: Kết quả được phân tích trên bàn đọc UV và so sánh với thang chuẩn ADN để xác định tính dương tính hay âm tính với virus WSSV.

2. Quy định đảm bảo an toàn: Cần tuân thủ quy định an toàn khi làm việc với phần mềm hóa chất độc hại, bảo vệ thiết bị và môi trường làm việc để tránh hiện tượng nhiễm chéo.

Tiêu chuẩn 28TCN 202:2004 cung cấp hướng dẫn cụ thể cho việc phát hiện virus gây bệnh nghiêm trọng này, hỗ trợ trong công tác điều trị và quản lý dịch bệnh trong ngành nuôi trồng thủy sản.